כתוצאה ממיזוגן של שתי חברות תעופה פרטיות, Aerolot ו-Aero, LOT Polish Airlines הוקמה ב-29 בדצמבר 1928. הן החלו לפעול בפועל ב-1 בינואר 1929, והפכו לאחת מחברות התעופה הפעילות הוותיקות בעולם.

ההתחלה של LOT הייתה צנועה אך מלאה בשאפתנות. הצי שלה כלל 21 מטוסים, אשר שירתו קווים מקומיים ובינלאומיים כאחד. הטיסה הראשונה לבוקרשט, שהושקה ב-1 באפריל 1930, סימנה את תחילת ההתרחבות של חברת התעופה לזירת התעופה הבינלאומית. עד מהרה נוספו יעדים אחרים כמו אתונה, ביירות והלסינקי.

בשנת 1930 הצטרפה "LOT" לקבוצה היוקרתית של איגוד התחבורה האווירית הבינלאומית (IATA). בשנת 1933, LOT העבירה את הבסיס שלה משדה התעופה של מוקוטוב למנחת חדש ומודרני באוקצי. בין השנים 1935 ל-1936 הצי הועשר במטוסים המודרניים ביותר בזמנו, כמו דוגלס DC-2, Lockheed L-10A Electra ו-Junkers Ju 52/3m, ומאוחר יותר Lockheed L-14H Super Electra.

במהלך שנות ה-30, LOT הייתה עדה והשתתפה באירועים משמעותיים בתולדות התעופה. בשנת 1938, המנהל הכללי שלה, הטייס רס"ן וואצלב מקובסקי, יחד עם הטייס זביגנייב ויסקיירסקי, ביצעו את הטיסה הראשונה של מטוס תקשורת דו-מנועי ממפעל בארה"ב לוורשה. הוא נמשך 85 שעות ועבר 24,850 ק"מ.

ערב מלחמת העולם השנייה, ב-1939, היו ל-LOT 26 מטוסים בצי והיא העסיקה 694 צוותים בעלי הכשרה מתאימה. רשת קשרי התעופה של LOT הייתה באורך 10,200 ק"מ וכללה 15 מדינות. פרוץ מלחמת העולם השנייה, שהופעל על ידי פלישת הרייך השלישי לפולין בספטמבר 1939, קטע את התפתחותה של LOT באכזריות. רוב הצי הושמד או נכלא, ופעילות החברה הופסקה. הפעילות התחדשה רק לאחר 1945.